Associação da expressão de proteínas-chave da biogênese dos micrornas, citocinas e apoptose em linhagens celulares de hepatocarcinoma humano experimentalmente infectadas com o vírus da Febre Amarela

Abstract

A Febre Amarela (FA) é uma zoonose transmitida por mosquitos da família Culicidae, ocasionada pelo vírus da Febre Amarela (VFA), que afeta os primatas não humanos e os humanos. Sua transmissão aos humanos ocorre por meio de picadas de mosquitos espécies Haemagogus janthinomys e Haemagogus leucocelaenus e Aedes aegypti. Sabe-se que a regulação realizada pelos microRNAs (miRNAs) podem ocasionar problemas e vantagens para os vírus, desde maior replicação viral até amplificação da resposta imune contra a infecção. Assim, pelo fato dos miRNAs celulares e os miRNAs virais estarem envolvidos na modulação da expressão gênica tanto viral quanto celular, além da resposta imune mediada por citocinas como IFN do tipo 1, uma análise das vias de genes alvos dos miRNAs em hepatócitos infectados pelo VFA se faz necessária. O objetivo deste trabalho foi avaliar a expressão dos RNA mensageiros (mRNAs) da via das proteínas-chave Dicer, Drosha, DGCR8 e família Argo de miRNAs, citocinas IFN-α, IFN-β, IFN-γ TGF- IIIR, TNF-α, TGF- β, IL-6 e IL-8 em células de carcinoma hepatocelular (HepG2), de modo a contribuir para o entendimento da patogênese do VFA em hepatócitos. Foram utilizadas técnicas de titulação viral, cinética viral de 24 hpi a 96 hpi, análise da ativação de Caspase 3/7 e analise da expressão das proteínas-chave da via dos miRNAs e citocinas por qRT-PCR. Como resultados foram obtidos valores significativos para Dicer, Drosha, DGCR8, Ago1, Ago2, Ago3, IFN-α, IFN-β, TGF- IIIR, TNF-α, IL-6, IL-8 e Caspase 3/7, onde observou-se o aumento da expressão de citocinas com o passar da infecção, o que pode ter influência na necrose, inflamação e apoptose celular. Os resultados do presente estudo suportam a conclusão de que a infecção viral pode ter um papel na regulação das proteínas chave dos miRNA, que podem modular a expressão de certos miRNAs importantes para a replicação viral, citocinas e resposta imune celular. Foi encontrado uma similaridade na expressão de Drosha e Ago1 durante a infecção pelo genótipo 1 e uma regulação negativa de Drosha, DGCR8 e Ago1 durante a infecção do genótipo 2 do VFA. A infecção viral induz o processo apoptótico, sendo notado que ao passar dos dias de infecção a ativação das Caspases 3/7 foi aumentando e isto pode estar relacionado com a susceptibilidade celular aos diferentes genótipos