Análise genotípica de cepas de noravírus provenientes de Manaus, Amazonas, no periódo de 2010-2014

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Hernandez, Juliana das Mercês
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Gabbay, Yvone Benchimolxmlui.dri2xhtml.METS-1.0.item-abstract
Resumo: Mundialmente, os norovírus (NoV) constituem uma das principais causas de gastrenterite
aguda (GA). Durante os últimos anos, têm-se observado a ascensão desses vírus como agentes
causadores de diarreia, sendo atualmente a segunda maior causa de GA viral em crianças e o
principal responsável por surtos de diarreia não-bacterianos. O objetivo deste estudo foi
realizar a genotipagem e caracterização filogenética dos NoV detectados em amostras fecais
de crianças com GA provenientes da cidade de Manaus, Amazonas, durante o período de
janeiro de 2010 a dezembro de 2014. Neste trabalho, foram analisadas amostras fecais
positivas para NoV pelo ensaio imunoenzimático (EIE). Primeiramente, foi realizada a
Reação em Cadeia da Polimerase Precedida de Transcrição Reversa (RT-PCR) para as regiões
B da polimerase e D do capsídeo viral, utilizando os iniciadores Mon 431/432/433/434 e Cap
C, D1 e D3, respectivamente. Vinte por cento das amostras caracterizadas como genótipo
GII.4 foram testadas e sequenciadas também com os iniciadores EVP2F/EVP2R específicos
para a região P2 do capsídeo viral. Nas amostras com genótipos discordantes quando
comparadas as regiões da polimerase e do capsídeo (D), sugestivas de recombinação, foi
realizada uma PCR para sequenciamento da região de junção da ORF1-ORF2 utilizando os
iniciadores Mon 431 e G2SKR. As análises filogenéticas foram realizadas por MáximaVerossimilhança
utilizando-se o programa IQTree v.1.3.0 com 1000 réplicas de bootstrap.
Edições nas árvores filogenéticas foram feitas com o programa FigTree v.1.4.2 e as análises
dos epítopos da região P2 no programa MEGA 6. As análises de recombinação foram
realizadas com as configurações padrões do programa SimPlot (v.3.5.1). Durante os anos de
2010 a 2014, os NoV foram detectados em 33,1% (349/1053) das amostras testadas pelo EIE.
Dentre estas, 250 foram testadas por RT-PCR e 75,6% (189) amplificaram por pelo menos
uma região do genoma, permitindo a genotipagem. A análise filogenética demonstrou os
seguintes genótipos: GII.Pe/GII.4 Sydney_2012, GII.P4/GII.4 New Orleans_2009,
GII.P8/GII.8, GII.P12/GII.12, GII.P15/GII.15, GI.P5/GI.5, GII.P4_US95_96/NG, além das
cepas recombinantes GII.P7/GII.6, GII.P22/GII.5, GII.Pg/GII.1, GII.Pg/GII.12. O genótipo
mais frequente foi o GII.4, na forma de suas variantes Sydney_2012 e New Orleans_2009, as
quais foram responsáveis por 52,4% (99/189) dos casos. Nos anos de 2010 e 2011, observouse
a circulação da cepa GII.P4/GII.4 New Orleans_2009 em maior frequência. A partir de
junho de 2012, essa cepa foi substituída pela cepa Sydney_2012, a qual predominou até o
final do estudo em 2014. A análise da região P2 demonstrou que nove cepas New
Orleans_2009 apresentavam mudanças aminoacídicas no aminoácido (AA) 294 localizado no
epítopo A e duas no AA 413 no epítopo E. Nas cepas Sydney_2012 foram identificadas cinco
mudanças nos AA nos epítopos antigênicos, são elas: 297 e 372 (epítopo A), 340 (epítopo C),
393 (epítopo D) e 412 (epítopo E). Ressalta-se a importância de dar continuidade a estudos
epidemiológicos e moleculares como este, a fim de se monitorar a incidência desse patógeno
na população, bem como identificar os genótipos circulantes, uma vez que os NoV sofrem
frequentemente eventos de mutação e recombinação.
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HERNANDEZ, Juliana das Mercês. Análise genotípica de cepas de noravírus provenientes de Manaus, Amazonas, no periódo de 2010-2014. 97 f. Dissertação (Mestrado em Virologia) - Instituto Evandro Chagas, Programa de Pós-Graduação em Virologia, Ananindeua, 2016.xmlui.dri2xhtml.METS-1.0.item-local
Ananindeua / PAxmlui.dri2xhtml.METS-1.0.item-department
Núcleo de Ensino e Pós-Graduaçãoxmlui.dri2xhtml.METS-1.0.item-grantor
Instituto Evandro Chagasxmlui.dri2xhtml.METS-1.0.item-decsPrimary
Norovirus / patogenicidadeNorovirus / virologia
Gastroenterite / virologia
Fezes / virologia
Recombinação Genética
Região Norte (BR)
Manaus (AM)