Perfil de expressão dos microRNAs 15 e 16 em células humanas durante infecção experimental pelo vírus Dengue

Abstract

A dengue é uma doença febril aguda causada por um vírus do gênero Flavivirus, família Flaviviridae, endêmica nas regiões tropicais e subtropicais do planeta. O agente é um vírus com RNA de fita simples, classificado em quatro sorotipos distintos Vírus Dengue (VDEN) 1, 2, 3 e 4. As respostas imunológicas inatas e adaptativas do hospedeiro exercem importante função na determinação da história natural das infecções virais, especialmente na dengue. Neste contexto vem sendo observado nos últimos anos que é cada vez maior a presença de pequenos RNAs nos processos de infecção viral, assim como de defesa imunológica. Tornando cada vez mais necessário o melhor entendimento do papel destes pequenos RNAs durante o da infecção viral por VDEN. Sendo assim, avaliamos a expressão dos miRNA-15, miRNA16 e das vias de caspase 3 e 7 em linhagens contínuas/ humanas durante a infecção pelos vírus DEN-1, DEN-2, DEN-3 e DEN-4. As células foram extraídas utilizando beads magnéticas e guardadas a -70oC até o momento de uso, para a quantificação da carga viral foi utilizado o método TaqMan com sondas marcadas em conjunto com o método de quantificação por curva absoluta através de um plasmídeo clonado em vetor do genoma dos quatro sorotipos, além de sondas marcadas para os miRNA usados no estudo. A quantificação da via de caspase 3 e 7 foi realizado com o uso de marcadores utilizando luciferina. Foi possível observar uma relação entre as vias de apoptose e os miRNAs-15 e 16, além dos mesmos demonstrarem que células hepáticas de origem humana sofrem mais intenso processo de apoptose durante infecção por VDEN. Esses achados reforçam a hipótese que estes miRNAs estão envolvidos com o processo de apoptose durante a infecção por VDEN e que isto acaba por agravar a infecção principalmente nos hepatócitos.